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荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,QPCR或RQ-PCR)

荧光定量PCR技术,是美国PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出来的一种核酸定量技术,实现了PCR从定性到定量的飞跃,基于荧光能量传递技术(fluorescence resonance energy transfer,FRET),通过检测PCR过程的荧光讯号而得知靶基因的初始浓度。荧光定量PCR技术在常规PCR基础上通过加入荧光标记探针以实现其定量功能,具有高灵敏性、高特异性和高精确性的特点。目前已被应用于病原体测定、肿瘤基因检测、免疫分析、基因表达、突变和多态性研究等多个领域。

荧光定量PCR应用简化了检测过程,其反应速度快,灵敏度高,特异性强,可重复性好,闭管操作,目前已被国内外多家厂家制成试剂盒,在临床推广。

数字PCR(Digital PCR,ddPCR或3dPCR)

该技术是一种新的DNA检测和绝对定量方法。与传统定量PCR(qPCR)技术不同,数字PCR是将传统PCR的指数倍信号转换成线性的数字信号,通过特定的仪器读值,并利用统计学方法来对PCR产物进行分析。

目前数字PCR技术包含微滴式和微孔式检测平台,原理都是将含有核酸分子的反应体系分成成千上万个单分子体系后,将单分子模板进行PCR扩增和核酸拷贝数精确定量。